摘要：应用分光光度计建立一种简便检测β-D-半乳糖苷酶(GAL)活性的方法.酶反应条件研究表明,在总体积为1 mL的0.1 mol/L柠檬酸反应缓冲体系(pH值为4.5)中含0.8 μmol的底物邻硝基苯β-D-吡喃半乳糖(ONPG),含相当于2 mg左右蛋白质的酶提取液,37 ℃孵育30 min后用0.5 mol/L碳酸钠1 mL终止反应,用紫外分光光度计于405 nm波长测定的吸光度值最能反映该酶活性.结果显示,该方法的批内变异系数在3.92%～4.89%之间,批间变异系数为3.8%,均小于5%;在所检测该酶质量浓度范围(1～2.5 mg/mL)内线性关系良好,当反应体系的蛋白含量低于0.5 mg/mL时,酶活性不能被检出;每组的平均回收率均在95%～105%之间,说明在所检测浓度范围内回收良好.因此,该方法具有稳定性好、灵敏度高、简便易行等特点,适合一般实验室应用.

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