摘要:目的:通过杂交技术获得能表达GAD67-GFP的fmr1基因敲除小鼠模型。方法:fmr1基因敲除(fmrl—ko)雌性小鼠(X—X-)和GAD67-GFP敲入基因杂合雄性小鼠(2+2-)杂交。鼠尾巴提取基因组DNA,用PCR方法鉴定所有子代基因型。对杂交后代小鼠进行行为学观察,并行脑组织切片观察绿色荧光蛋白在γ-氨基丁酸能神经元的表达。结果:PCR方法证实通过杂交繁殖出四种基因型小鼠:同时带有杂合fmrlko及GAD67-GFP位点的雌性小鼠(X+X-/2+2-)、带有纯合fmr1—ko及GAD67-GFP位点的雄性小鼠(X—Y/2+2-)、不带有GAD67-GFP的雌性和雄性小鼠(X+X-/2-2-,X—Y/2-2-)。观察发现X—Y/2+2-小鼠具有fmr1-ko小鼠类似的行为学表现,同时在显微镜下观察到X—Y/2+2-小鼠脑组织切片有发绿色荧光的GABA神经元。结论:该杂交小鼠成功表达了GAD67-GFP,为研究γ-氨基丁酸能神经元在脆性X综合征发病机制中的作用提供-种可靠的模型。
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