摘要：目的:探讨一种新的有效的体外连接方法构建重组腺病毒转移载体.方法:将目的基因heNOS(人内皮型一氧化合酶)亚克隆到穿梭质粒pShuttle启动子CMV的下游,再通过I-Ceu Ⅰ和PI-Sce Ⅰ两个稀有酶切位点,将目的基因heNOS与腺病毒质粒DNA(pAdeno-X)进行体外连接,获得含目的基因heNOS重组腺病毒质粒DNA,后者经限制性内切酶Pac Ⅰ切割后,两端露出反向末端重复序列(ITR),利用脂质体转染293细胞,获得含目的基因重组腺病毒上清.PCR双引物检测含有目的基因heNOS片段.结果:PCR双引物检测含有目的基因heNOS片段,表明利用体外连接法成功构建了含目的基因heNOS重组腺病毒转移载体.结论:体外连接法是一种有效的复制缺陷型重组腺病毒构建方法.

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