摘要：目的：通过检测急性冠脉综合征（acute coronary syndrome,ACS）患者外周血CD4＋T淋巴细胞基因的miRNA,筛选与健康正常人差异表达的miRNA,鉴定对CD4＋T淋巴细胞具有调控作用miRNA,初步阐明miRNA在ACS发病机制中的作用。方法：选取入住我院的确诊为ACS患者20例为ACS组,以疑似ACS而冠脉造影正常的住院患者20例作为正常对照组;首先抽取新鲜外周静脉20 m L,使用密度梯度离心法分离出循环血中的单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,再使用免疫磁珠法（Magnetic cell sorting system,MACS）进一步分离出CD4＋T淋巴细胞;分离的CD4＋T淋巴细胞一部分用于检测纯度,另一部分用于芯片检测。CD4＋T淋巴细胞纯度检测采用流式细胞术法（Flow cytometry,FCM）检测,分离所得的CD4＋T淋巴细胞纯度,且采用台酚蓝检测活细胞数。CD4＋T淋巴细胞合格后再行下一步实验,即将另一部分CD4＋T淋巴细胞采用Trizol法提取其细胞内总RNA后分两部分,一部分提取的RNA采用聚乙二醇（Poly ethylene glycol,PEG）方法分离纯化miRNA,另一部分用于real time PCR备用。用分光光度计测定RNA的浓度,使用凝胶电泳质检RNA的质量,合格后再使用miRNA基因芯片进行杂交,再用Affymetrix Gene Chip Scanner 3000基因芯片扫描仪检测CD4＋T淋巴细胞差异表达的miRNA。另一部分RNA采用实时荧光定量聚合酶链式反应（Realtime PCR）对部分差异表达的miRNA进行验证。结果：使用MACS法分离出高纯度的人CD4＋T淋巴细胞。Trizol法能够提取其细胞内较完好的总RNA。miRNA芯片杂交检测及数据分析结果显示,ACS患者与正常对照者CD4＋T淋巴细胞中,在ACS患者中表达显著上调的有：miR-16,miR-145,miR-133b和miR-155,在ACS患者中表达显著下调的有：miR-126和miR-211。实时定量结果显示,与对照组比较,ACS组miR-16,miR-145,miR-133b和miR-155的基因表达均显著上调,miR-126和miR-221的基因表达�

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