摘要：目的：构建针对M2型丙酮酸激酶（PKM2）基因3个可干扰序列设计小发夹RNA（small hairpin RNA,shRNA）载体,为下一步探索Ad-PKM2介导PKM2 RNAi对乳腺癌细胞作用及机制建立基础。方法：根据RNAi设计软件设计并合成3对shRNA模板序列,依次将它们克隆至pGenesil载体中构建重组质粒,通过MTT检测筛选出对乳腺癌细胞株MCF-7增殖效应影响最强的RNAi序列。结果：酶切鉴定和测序结果证实RNAi载体构建成功,均能高效感染MCF-7并抑制MCF-7细胞的增殖,pGenesil-PKM2-（1＋2＋3）的抑制能力最强。结论：针对PKM2多靶点RNAi载体成功构建,为下一步研究PKM2被沉默后细胞生物学行为的变化打下基础。

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