摘要：为了确立红豆杉总RNA的最适提取方法,本研究以南方红豆杉嫩叶和曼地亚红豆杉愈伤组织为材料,比较了改良十六烷基三甲基溴化铵(Hexadecyl trimethyl ammonium bromide,CTAB)法、试剂盒法和Trizol法提取总RNA的效果。分别采用紫外分光光度计、凝胶电泳、传统m RNA差异显示技术(differential display of reverse transcriptional PCR,DDRT-PCR)和实时定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)等技术,测定三种方法提取叶片和细胞系总RNA的浓度、纯度和完整性。结果表明,试剂盒法和改良CTAB法均可以从两种材料中获得较好的提取效果,无RNA降解。相比较而言,CTAB法提取红豆杉愈伤组织和嫩叶总RNA质量最好,浓度较高,OD260/OD280分别为2.44、2.21,OD260/OD230分别为2.11、2.10,浓度分别为621.77 ng/μL、521.10 ng/μL;试剂盒法提取愈伤组织和嫩叶总RNA的OD260/OD280分别为1.98、0.73,OD260/OD230分别为2.15、1.81,浓度分别为609.95 ng/μL、381.53 ng/μL;本研究中Trizol法仅可以从愈伤组织中提取出总RNA,并且提取的总RNA略有降解,伴有少量多糖或蛋白污染,测定的OD260/OD280为1.87,OD260/OD230为2.04,浓度为669.07 ng/μL。经DDRT-PCR和qRT-PCR验证,试剂盒法和改良CTAB法提取的总RNA能够直接用于qRT-PCR等相关实验,并为提取高质量红豆杉总RNA提供借鉴和参考。

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