摘要：基于激光共焦构型,构建了一套高灵敏度和高稳定性的荧光相关光谱单分子检测系统.采用高数值孔径物镜使激光束高度聚焦,并用同一物镜收集样品的荧光,单光子计数器用于实时记录荧光信号.优化系统保持物镜焦点、针孔以及单光子计数器光敏区高度同轴.采用60×1.2(NA)的水浸物镜及直径为160 μm的针孔得到的检测系统结构参数为ω0和z0分别为0.42 μm和1.33 μm,照射微区的体积为1.3 fL.单个Rhodamine Green分子可获得13倍的信噪比.用该系统获得了小分子和生物大分子(DN段和蛋白质)的高质量荧光相关图谱,成功实现了单个分子的检测.

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