首页 期刊 淡水渔业 青鱼Dazl基因的原核表达及其多克隆抗体制备 【正文】

青鱼Dazl基因的原核表达及其多克隆抗体制备

作者:王艺舟; 潘启华; 王乾; 夏必琳; 罗君志; 方健; 邓羽; 廖明聪; 陈天圣 华中农业大学水产学院; 农业部淡水生物繁育重点实验室; 武汉430070; 水产高效健康生产湖南省协同创新中心; 湖南常德415000
mylopharyngodon   piceus   dazl   原核表达   多克隆抗体  

摘要:实验进行了青鱼( Mylopharyngodon piceus ) Dazl 基因的原核表达,兔抗青鱼源Dazl多克隆抗体的制备及抗体的特异性验证。首先将青鱼 Dazl 基因的编码区利用重组表达引物从pCS2- MpDazl 质粒中扩增出来,经酶切后连接到pET-28a载体中,构建pET-28a- MpDazl 重组表达载体。然后将pET-28a- MpDazl 重组质粒转化至大肠杆菌( Escherichia coli )BL21中,利用异丙基-β-d-硫代半乳糖苷( IPTG)诱导表达,获得分子量为27 kD的Dazl重组蛋白。将纯化的Dazl重组蛋白作为抗原免疫家兔制备多克隆抗体,抗体的效价和特异性通过ELISA法和 Western blot检测。结果:成功构建重组表达载体pET-28a- MpDazl;以0.5 mmol/L IPTG在37 ℃条件下诱导4 h可获得高效表达的Dazl重组蛋白;制备的兔抗青鱼Dazl多克隆抗体能够特异性识别原核表达Dazl蛋白、青鱼卵巢的内源Dazl蛋白以及细胞中过表达的Dazl蛋白,并证实了青鱼Dazl蛋白在性腺中表达的特异性。

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