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RNA干扰Gas2基因对低温胁迫下罗非鱼肾脏细胞系增殖及凋亡的影响

杨长庚; 文华; 王美姿; 陆星; 蒋明; 田娟; 喻丽娟 中国水产科学研究院长江水产研究所; 武汉430223; 岭南师范学院生命科学与技术学院; 广东湛江524048
  • 短发夹rna  
  • 罗非鱼  
  • 生长抑制特异性基因2  
  • 细胞增殖  
  • 细胞凋亡  

探讨低温胁迫下,干扰生长抑制特异性基因2 ( Gas2)对罗非鱼肾脏细胞系增殖和凋亡的影响。采用脂质体转染法介导Gas2短发夹RNA ( short hairpin RNA, shRNA)及阴性对照短发夹RNA处理罗非鱼肾脏细胞,24 h后,以5 ℃/d降温速率对转染后的罗非鱼肾脏细胞进行低温胁迫,分别在25、20、15、10 ℃进行细胞采集。随后,利用实时荧光定量PCR检测Gas2基因及P53基因mRNA表达变化,利用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,并开展WST-1细胞增殖实验检测细胞的增殖情况。结果表明,低温胁迫下,阴性对照组及Gas2干扰组中Gas2和P53基因mRNA的表达在15 ℃和10 ℃时均显著升高;Gas2干扰组中Gas2和P53基因mRNA的表达水平在所有温度下均显著低于阴性对照组;随着温度降低,阴性对照组及Gas2干扰组的细胞凋亡率均明显升高,但Gas2干扰组的细胞凋亡率明显低于阴性对照组;低温胁迫下,对照组及Gas2干扰组的细胞增殖率与25 ℃时相比均显著下降;当温度降至15 ℃时,Gas2干扰组的细胞增殖率显著高于对照组。罗非鱼肾脏细胞在受低温胁迫时,抑制Gas2基因能够降低P53基因mRNA的表达水平以及细胞的凋亡率,并增加细胞的增殖。

  • 基于线粒体COI基因序列的蒙古鲌群体遗传结构分析

    作者:谢佳燕; 颜渊; 杨钰慧; 林少卿 期刊:《淡水渔业》 2019年第03期

    采用线粒体COI基因序列对长江流域湖北段和江苏段蒙古鲌(Chanodichthys mongolicus)不同自然群体的遗传组成和结构进行了分析。结果显示,蒙古鲌种群的遗传多样性水平中等,群体的平均基因多态性为0.664,核苷酸多态性为0.002,不同种群间遗传多样性存在一定的差异。COI基因序列共检测了10种单倍型,其中4种单倍型在蒙古鲌不同种群间共享,其余单倍型为单个种群所特有。分子变异分析表明79.7%的变异发生在种群内。NJ聚类树和单倍型网络图分析均表明蒙古鲌不同种群未形成明显的谱系地理结构。

  • 三氯生对雄性斑马鱼鳃组织凋亡相关基因表达的影响

    作者:刘海芳; 王凡; 姚卫云 期刊:《淡水渔业》 2019年第03期

    为探究三氯生(TCS)对于硬骨鱼类的凋亡相关基因表达的影响,以雄性斑马鱼(DanioRerio)为试验动物,采用半静态水体接触染毒法,将斑马鱼分别置于质量浓度为17、34和68μg/L的TCS溶液中,并设计空白对照组,42d后,对鳃组织进行采样,利用普通PCR和RT-qPCR技术分析雄性斑马鱼鳃组织凋亡基因Bcl-2、Bax、MDM2、p53的表达量。研究发现,与空白对照组相比,Bax和p53基因在TCS处理组中的表达量都出现了下调趋势,且在68μg/L的TCS处理组中表达水平显著下调;Bcl-2在各TCS处理组中无显著变化;MDM2基因在34μg/L和68μg/LTCS处理浓度组中表现为极显著上调。研究结果表明:高浓度TCS对雄性斑马鱼鳃组织凋亡相关基因的表达具有一定的影响。

  • 青鱼Dazl基因的原核表达及其多克隆抗体制备

    作者:王艺舟; 潘启华; 王乾; 夏必琳; 罗君志; 方健; 邓羽; 廖明聪; 陈天圣 期刊:《淡水渔业》 2019年第03期

    实验进行了青鱼( Mylopharyngodon piceus ) Dazl 基因的原核表达,兔抗青鱼源Dazl多克隆抗体的制备及抗体的特异性验证。首先将青鱼 Dazl 基因的编码区利用重组表达引物从pCS2- MpDazl 质粒中扩增出来,经酶切后连接到pET-28a载体中,构建pET-28a- MpDazl 重组表达载体。然后将pET-28a- MpDazl 重组质粒转化至大肠杆菌( Escherichia coli )BL21中,利用异丙基-β-d-硫代半乳糖苷( IPTG)诱导表达,获得分子量为27 kD的Dazl重组蛋白。将纯化的Dazl重组蛋白作为抗原免疫家兔制备多克隆抗体,抗体的效价和特异性通过ELISA法和 Western blot检测。结果:成功构建重组表达载体pET-28a- MpDazl;以0.5 mmol/L IPTG在37 ℃条件下诱导4 h可获得高效表达的Dazl重组蛋白;制备的兔抗青鱼Dazl多克隆抗体能够特异性识别原核表达Dazl蛋白、青鱼卵巢的内源Dazl蛋白以及细胞中过表达的Dazl蛋白,并证实了青鱼Dazl蛋白在性腺中表达的特异性。

  • 结合线粒体D-loop序列和SSR标记对宝石鲈养殖群体遗传多样性的分析

    作者:赵立祥; 董浚键; 孙成飞; 田园园; 胡婕; 卢迈新; 叶星 期刊:《淡水渔业》 2019年第03期

    采用线粒体D-loop序列及SSR标记分析广东4个宝石鲈(Scortum barcoo)养殖群体的遗传多样性。D-loop序列分析显示,长度为598bp的D-loop片段上有14个多态性位点,共定义8个单倍型。4个群体单倍型多样性指数、核苷酸多样性指数分别为0.0000~0.5435、0.00000~0.00176,表明4个群体遗传多样性水平均较低。利用11个SSR位点分析显示,4个群体期望杂合度(He)=0.396~0.516、PIC=0.320~0.420,说明各群体遗传多样性处于中低水平。虽然二种方法获得的遗传分化指数FST上存在差异,分别为0.4035(D-loop)和0.0445(SSR),但二种分析结果均显示4个广东群体的遗传多样性较低、亲缘关系较近,因此有必要引进原种以丰富国内养殖群体的遗传多样性。

  • 绥芬河大麻哈鱼的生长分析

    作者:王继隆; 刘伟; 王维坤; 杨文波 期刊:《淡水渔业》 2019年第03期

    为了解绥芬河大麻哈鱼( Oncorhynchus keta Walbaum)的年龄、生长以及初次性成熟叉长情况。通过对2015 2017年采捕到的绥芬河大麻哈鱼洄游群体241个样本的鳞片观察和基础生物学测定,将其分为1 +、2 +、3 +、4 +、5 +五个年龄组,采用Von Bertalanffy生长方程模拟了大麻哈鱼不同性成熟年龄以及雌、雄个体间的生长,通过最大似然法估计模型的参数。残差平方和分析( ARSS)显示,绥芬河大麻哈鱼雌、雄个体间以及不同性成熟年龄组( 2 +,3 +)间的生长差异显著。采用Logistic曲线方程拟合了绥芬河大麻哈鱼的性成熟概率曲线,结果显示大麻哈鱼雌性个体的50%初次性成熟叉长( L 50 )比雄性大,ARSS分析结果表明不同年份间雌、雄个体的性成熟概率差异极其显著。此外,调查结果显示绥芬河大麻哈鱼的平均叉长有减小的趋势,且出现低龄( 1 +龄)个体。

  • 传染性造血器官坏死病毒环介导等温扩增检测方法的建立和初步应用

    作者:何亚鹏; 陈怡静; 时晓; 张宝莉; 温战华; 陈春山; 李博; 杜迎春 期刊:《淡水渔业》 2019年第03期

    实验建立了一套反转录环介导等温扩增方法( reverse transcription loop-mediated isothermal amplification,RT-LAMP),用于实验室及现场检测鲑鳟鱼传染性造血器官坏死病毒( infectious haematopoietic necrosis virus,IHNV)。针对IHNV的核蛋白基因设计特异性引物,以IHNV基因组RNA为模板,在反转录酶及Bst DNA聚合酶的作用下进行反转录LAMP,结果阳性样本表现为荧光绿色,阴性样本仍为红棕色。反应条件优化结果表明最适反应温度为64 ℃;特异性试验表明仅IHNV发生特异性扩增,而SVCV、HRV、VHSV和H 2 O均不发生反应;敏感性试验表明该LAMP方法可检出浓度为1.0×10^-4 μg/μL的IHNV核酸。本研究所建立的IHNV反转录LAMP检测法成本低、操作简单、反应迅速、不依赖专门的仪器,同时具有较高的灵敏度和特异性,适合IHNV的现场检测和大批量样品的检疫。

  • 六种常用渔药对宽体金线蛭的急性毒性试验

    作者:唐毅; 吴荣华; 袁渊; 孙龙龙; 唐红霞; 安小平; 沈财祥 期刊:《淡水渔业》 2019年第03期

    在水温26.5~28.5℃的室内静水条件下,研究了二氧化氯、高锰酸钾、苯扎溴铵、戊二醛、伊维菌素和聚维酮碘对宽体金线蛭(Whitmania pigra)幼蛭的急性毒性效应。结果显示:6种药物对宽体金线蛭幼蛭48h的半致死质量浓度(LC50)分别为11.8850、3.7154、0.0056、0.1426、0.0066和6.4595mg/L;安全质量浓度(SC)分别为1.5593、0.4781、0.0003、0.0068、0.0002和0.6769mg/L。宽体金线蛭幼蛭对以上6种药物的敏感性差异较大,敏感性大小依次为:伊维菌素>苯扎溴按>戊二醛>高锰酸钾>聚维酮碘>二氧化氯。结果表明,二氧化氯和聚维酮碘在宽体金线蛭幼蛭养殖过程中可以安全使用,而伊维菌素、苯扎溴铵、戊二醛和高锰酸钾需慎用。

  • 嘉陵江梯级水利工程开发下不同江段蛇鮈的繁殖生物学特性差异及适应

    作者:刘玉莹; 曾燏; 熊小琴; 吕振宇; 胡月; 蒋朝明; 程磊; 俞丹莉 期刊:《淡水渔业》 2019年第02期

    2015年1-12月(除2-4月外)在嘉陵江不同江段(上、中、下游)采集蛇鮈(Saurogobio dabryi)样本,进行繁殖生物学比较研究。结果显示:嘉陵江蛇鮈的最小性成熟年龄均为1+龄,性比接近1∶1,且在不同江段间无显著性差异;不同江段蛇鮈的最小性成熟规格存在一定差异,其中,上游、中游最小性成熟个体体长、体重均无显著差异,但都显著大于下游蛇鮈;上、中、下游的蛇鮈繁殖期分别为2-6月、2-5月、2-4月;蛇鮈绝对生殖力和相对体长生殖力的变化趋势均为上游>下游>中游,相对体重生殖力的变化趋势为下游>上游>中游,卵径大小变化趋势为:中游>上游>下游。

  • 斑鳠消化系统组织结构及适应性特征研究

    作者:刘亚秋; 李新辉; 李跃飞; 徐田振 期刊:《淡水渔业》 2019年第02期

    为了解斑鳠(Mystus guttatus)消化系统组织结构特征,采用形态解剖和组织学方法对斑鳠消化系统进行研究。结果表明,斑鳠为一种杂食性偏肉食性鱼类,解剖观察其消化道结构包括口咽腔、食道、胃、肠及肛门,肝脏和胰脏为其主要的外消化腺。组织学观察发现口咽腔上皮组织中有较为丰富味蕾和黏液细胞;食道粗而短,肌层发达,且含有丰富的黏液细胞;胃贲门部和盲囊部,体壁较厚,胃壁内侧有丰富的黏膜褶皱,黏膜层为单层柱状上皮,分布大量的分泌胃酸和胃蛋白酶原的管状腺体,胃幽门部内层为环肌层,外层为纵肌层;斑鳠肠道系数为(0.89±0.11),肠道分为前肠、中肠和后肠三部分,肠腔内有丰富黏膜褶皱,褶皱高度从前向后逐渐降低。肠黏膜上皮肠粘膜表层为单层柱状上皮,在黏膜上皮分布大量的黏液细胞。肝脏与胰脏分离,肝脏分为两叶,胰脏弥散分布于肠系膜上。斑鳠消化系统结构特征与其喜好摄食甲壳类动物密切相关。

  • 四川华鳊精子发生显微及超微结构观察

    作者:尹敏; 解崇友; 金丽; 王志坚 期刊:《淡水渔业》 2019年第02期

    对四川华鳊(Sinibrama taeniatus)精子发生过程进行了显微及超微结构观察。结果显示:在四川华鳊精子发生过程中,生精细胞嗜碱性逐渐增强,细胞体积渐小;精原细胞可分为两种,二者在显微及超微结构上均有明显区别;从精原细胞分裂开始就出现胞质不完全分裂,相邻细胞通过细胞质桥连接,并在精子细胞变态中后期消失;初级精母细胞核仁在减数第一次分裂开始后会逐渐消失;精子细胞变态过程中可观察到互相垂直的基体和近端中心粒,晚期出现中心粒附属物并在精子成熟前逐渐萎缩至消失,近端中心粒也在精子成熟时消失;四川华鳊精子头部近圆形或稍不规则,无顶体,核空泡小,核凹窝不发达,尾部具两侧对称的侧鳍,轴丝为“9+2”双联体微管结构。

  • 饮用水水源地盐龙湖鱼类群落结构特征及调控策略研究

    作者:蔡杏伟; 熊鹰; 郭超; 张堂林; 李为; 李林; 宋立荣; 杜观超; 高旭; 刘家寿 期刊:《淡水渔业》 2019年第02期

    为探明饮用水水源地盐龙湖鱼类群落结构特征,于2015年10月-2016年10月对盐城市饮用水水源地盐龙湖的鱼类群落结构特征及其物种多样性进行了多网目复合刺网和电捕的调查研究。结果显示:盐龙湖现有鱼类6目9科36种,其中鲤形目种类最多,为27种,占物种总数的75%。群落优势种均为小型鱼类,分别占总渔获量和渔获物个体总数的65.87%和76.67%。主要优势种为似鳊(Pseudobrama simony)、鲫(Carassius auratus)、(Hemiculter leucisculu)、短颌鲚(Coilia brachygnathus)。代表物种多样性特征的Shannon-Wienner多样性指数(HN)为2.08,Wilhm改进指数(HW)为2.30,Simpson优势度指数(λ)为0.21,Piesous均匀度指数(J)为0.59,Margalef物种丰富度指数(D)为4.49;相对稀有种数(R)为63.89%。这些结果表明:盐龙湖鱼类群落结构简单、小型化形势严峻,且食鱼性鱼类鳜(Siniperca chuatsi)、翘嘴鲌(Channa argus)和乌鳢(Culter alburnus)等密度和生物量偏低,无法对小型鱼类进行有效控制。因此,水源地湖泊中应采用提高食鱼性鱼类生物量的经典生物操纵手段对鱼类群落进行调控,以利于生态系统健康和水质保护。

  • 湘江汨罗江段鱼类资源季节变化及洄游特征研究

    作者:刘艳佳; 高雷; 郑永华; 段辛斌; 刘绍平; 陈大庆; 刘寒文 期刊:《淡水渔业》 2019年第02期

    2017年7月-2018年6月,对湘江下游汨罗江段的仔鱼及幼鱼、成鱼开展了逐月调查,采集仔鱼1559尾,隶属于4科12种,其中江湖洄游型鱼类7种,468尾,分别占总量的58.3%和30.0%;采集幼鱼、成鱼1258尾,隶属于8科42种,其中江湖洄游性鱼类16种,547尾,11486.8g,分别占总量的38.1%、43.6%和40.7%。分析结果表明,仔鱼及幼鱼、成鱼的丰度呈现明显的季节性变化特征,均为夏季高,冬季低;4-8月份,江湖洄游型鱼类的运动指数在0.1~0.7之间,呈现入湖趋势;10月份至次年3月份,江湖洄游型鱼类的运动指数在-0.7~-0.3之间,呈现出湖趋势;幼鱼、成鱼的丰度基本上夜间高于白天的;径流量和水温是鱼类出、入湖的主要驱动因子。

  • 鲤浮肿病检测方法实验室间比对的结果与评价

    作者:陈孝宇; 陈鑫; 王津津; 范引光; 曾宪东; 郑剑 期刊:《淡水渔业》 2019年第02期

    鲤浮肿病( carp edema virus disease,CEVD)是在锦鲤中发现的一种传染性病毒病,近年来在全球传播迅速,对鲤养殖业造成严重损害。本研究设计CEV环介导等温扩增( loop-mediated isothermal amplification,LAMP)引物,进行特异性实验;选取套式PCR、荧光PCR和LAMP三种检测方法,组织10家实验室进行室间比对测试:制备含CEV病毒核酸的测试样品,评价其均匀性和稳定性,通过测试结果分析方法检出限。结果显示,套式PCR的核酸样品检测限可达6.8×10^-10 g。

  • 自养硝化过程去除循环水养殖系统水体中氨氮的研究进展

    作者:罗国芝; 吴慧芳; 谭洪新 期刊:《淡水渔业》 2019年第02期

    氨氮是养殖水体主要的控制指标,自养硝化过程将水体中的氨氮经亚硝酸盐转化成硝酸盐,是水体中氨氮最常见的一种转化途径,也是循环水养殖系统中常用的氨氮控制方式。根据国内外关于循环水养殖水体中自养硝化过程的研究报道,结合养殖水体特征,分析了利用固定膜式自养硝化过程控制养殖水体氨氮的优势和劣势、水产养殖过程中影响自养硝化效率的因素以及在实际使用过程中的注意事项,对自养硝化过程的建立进行重点介绍,为实际应用提供参考。

  • “新吉富”罗非鱼选育后期连续12个世代的选育效果分析

    作者:唐首杰; 颉晓勇; 赵岩; 于爱清; 赵金良; 李思发 期刊:《淡水渔业》 2019年第02期

    为了解“新吉富”罗非鱼(Oreochromis niloticus)选育后期世代在长期选择下获得的遗传进展,对“新吉富”罗非鱼选育后期连续12个世代(F9~F20)的生长性能进行了连续12年(2005-2016年)的跟踪评估。结果显示:随着选育世代的累进,“新吉富”罗非鱼选育后期世代F9~F20的生长速度、体重变异系数并没有呈现持续升高或持续降低的趋势,而是在世代间出现了一定程度的波动。经过12个世代的连续选育,选育系F20的生长速度比F8提高了25.23%~69.34%,平均每代获得的相对遗传进展为2.00%~5.29%,不同世代的选育效果存在一定程度的变动。研究结果表明,在选育后期连续12代的混合选育过程中,“新吉富”罗非鱼选育系获得了持续的遗传进展,由此推测,对“新吉富”罗非鱼的选育工作尚未达到选育极限,选育系F20仍具有进一步选育的潜力。

淡水渔业

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