首页 期刊 淡水渔业 鲫脑组织细胞系酵母双杂交cDNA文库的构建及初步应用 【正文】

鲫脑组织细胞系酵母双杂交cDNA文库的构建及初步应用

作者:许晨; 周勇; 史玉恒; 范玉顶; 刘文枝; 江南; 赵建青; 曾令兵 中国水产科学研究院长江水产研究所; 武汉430223
酵母双杂交   鲫脑组织细胞cdna文库   鲤疱疹病毒ii型orf25编码蛋白   蛋白质的互作  

摘要:为深入研究鲤疱疹病毒II型CyHV-2与宿主细胞相互作用机制,以鲫脑组织细胞系(Gibel carp brain,GiCB)总RNA为模板,反转录合成cDNA,扩增获得双链cDNA,与载体pGADT7-Rec共转化酵母菌Y187,构建了GiCB细胞酵母双杂交cDNA文库。以CyHV-2ORF25编码蛋白为诱饵,与GiCB细胞酵母双杂交cDNA文库杂交,筛选与其互作的GiCB细胞受体。结果显示:GiCB细胞酵母双杂交cDNA文库转化效率为1.03×10^6CFU/μg,滴度为1.24×10^6CFU/mL,PCR扩增结果表明文库中插入片段的大小在1.5kb左右。将表达CyHV-2ORF25编码蛋白的诱饵菌与GiCB细胞酵母双杂交cDNA文库杂交后,筛选得到与ORF25编码蛋白相互作用蛋白的阳性克隆,为进一步研究CyHV-2的感染机制奠定了前期基础。

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