摘要：目的探讨微RNA⁃29b(miR⁃29b)在心肌缺血/再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)损伤过程中是否发挥保护作用并探讨其可能的调控机制。方法通过100μmol/L叔丁基过氧化氢(TBHP)诱导H9C2心肌细胞损伤构建I/R细胞模型;分别设立正常对照组,TBHP处理组,NC miRNA处理组,miR⁃29b类似物(mimic)处理组。通过实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(qPCR)检测各组心肌细胞内miR⁃29b表达量;人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK⁃8)检测各组心肌细胞的存活率;蛋白质印迹法(West⁃ern Blot)检测心肌细胞中凋亡蛋白和蛋白激酶B(Akt)蛋白磷酸化水平的改变。另一方面,将30只C57/B6小鼠(6~7周龄)逐个编号,通过随机数字表法抽样,随机分为三组,设立I/R组、NC miRNA处理组和miR⁃29b激动剂(agomir)处理组,其中miR⁃29b agomir组小鼠预先给予miR⁃29b agomir治疗。结扎冠状动脉左前降支30 min,然后再灌注4 h建立心肌缺血再灌注动物模型。通过埃文斯蓝(Evans)和2,3,5⁃氯化三苯基四氮唑(TTC)双重染色评估三组小鼠心肌梗死面积;qPCR检测各组小鼠心肌组织内miR⁃29b表达量;蛋白质印迹法检测心肌组织内凋亡蛋白改变。结果细胞层面:与TBHP处理组相比(65±3)%,上调miR⁃29b表达可增加心肌细胞的存活率(85±3)%,下调心肌细胞凋亡蛋白表达(0.86±0.07)。进一步的蛋白质印迹法实验结果表明:与TBHP处理组(0.81±0.05)相比,上调miR⁃29b能够抑制Akt蛋白磷酸化(0.41±0.02)。动物层面:miR⁃29b agomir处理组小鼠心肌梗死面积(24±3)%与I/R组(62±2)%相比明显减少,且心肌组织凋亡蛋白表达明显减少(0.32±0.04)。结论上调miR⁃29b表达可以减少缺血再灌注损伤引起的心肌细胞凋亡。miR⁃29b可能是通过调控靶基因Akt磷酸化水平,下调心肌细胞凋亡水平,从而保护心脏。

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