首页 期刊 安徽医科大学学报 二氢生物喋呤还原酶减轻脂肪酸诱导的细胞凋亡的机制研究 【正文】

二氢生物喋呤还原酶减轻脂肪酸诱导的细胞凋亡的机制研究

作者:古艳婷; 冯茹; 孙斯凡 航空总医院药剂科; 北京100012
二氢生物喋呤还原酶   hek293t细胞   凋亡   beclin1   活性氧簇  

摘要:目的 探讨二氢生物喋呤还原酶(QDPR)高表达对脂肪酸(PA)诱导的细胞凋亡的作用。方法 HEK293T细胞转染实验分为A、B、C 3组,A组为空载体转染组,B组为经过PA刺激的空载体转染组,C组为经过PA刺激的QDPR重组质粒转染组。首先将空载体及构建的QDPR重组质粒分别转染至HEK293T细胞,培养24 h后采用0.5 mmol/L PA刺激上述细胞,将没有经过PA刺激的空载体组细胞、PA刺激的空载体组细胞和PA刺激QDPR重组质粒组细胞三组细胞继续培养24 h后收集细胞。采用四氢生物喋呤(BH4)和活性氧簇(ROS)检测试剂盒检测3组BH4和ROS的生成量;采用Western blot法检测3组凋亡相关蛋白Beclin1、Caspase 3和Beclin 2的表达。结果 (1)转染细胞后,QDPR融合蛋白成功表达;(2)与A组相比,B组的BH4生成量差异无统计学意义;与B组相比,C组BH4生成量明显增多(P〈0.05);(3)与A组相比,B组的ROS生成量明显增加(P〈0.05);与B组相比,C组ROS生成量明显下降(P〈0.05);(4)Western blot结果显示:与A组相比,B组经过PA刺激后细胞中Beclin 1和Caspase 3表达水平显著上调(P〈0.05),Beclin 2表达水平下降(P〈0.05);QDPR过表达后C组Beclin 1和Caspase 3表达水平显著下调(P〈0.05),Beclin 2表达水平升高(P〈0.05)。结论 QDPR高表达后,可以刺激BH4的生成,同时能降低PA诱导的ROS的生成量,还可以降低细胞凋亡相关蛋白Beclin 1和Caspase 3的表达,增强抗凋亡蛋白Beclin 2的表达,提示其可能通过调节BH4和ROS含量影响细胞凋亡。

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