摘要：目的:通过改进大鼠睾丸支持细胞的分离方法,获得高纯度支持细胞。方法:选用18~22日龄雄性Sprague Dawley(SD)大鼠,去除睾丸被膜、剪碎组织块,采用0.25%胰酶和0.1%Ⅳ型胶原酶单次消化,分别在37℃水浴震荡消化15 min、10 min,经100目细胞筛过滤收集细胞,置于37℃、5%CO 2培养箱中进行培养,24 h后大多数细胞完全贴壁,观察细胞生长,待长满培养瓶80%进行传代培养。显微观察不同时间段、不同代睾丸支持细胞的形态,采用免疫荧光方法对睾丸支持细胞进行鉴定。结果:显微观察可见分离培养的支持细胞胞质呈不规则的多处突起,细胞核呈圆形或椭圆形,细胞之间交织成网状;免疫荧光Vimentin特异性表达鉴定显示,所分离培养的细胞为睾丸支持细胞,经显微镜下计数其纯度达95%以上。结论:缩短两步酶消化时间,培养24 h后用预冷磷酸盐缓冲溶液(PBS)洗换培养液,连续传代培养至第三代,此方法简化了分离培养支持细胞步骤,同时提高了支持细胞的纯度和细胞数量。

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