作者:周婧媛; 吴慧洁; 刘爱群 期刊:《中华肿瘤防治》 2019年第22期
作者:杨振国; 张悠然; 廖壮槟; 李强; 黄洪新; 张晶晶 期刊:《广东医科大学学报》 2015年第04期
目的利用Tet-On诱导可调控系统构建表达淀粉样前体蛋白突变基因(APPswe)细胞模型。方法构建重组质粒p TRE-APPswe-Flag,利用慢病毒将其包装转染SH-SY5Y细胞。Puromycin筛选72 h后,通过强力霉素诱导,Western blot检测验证,免疫荧光检测APPswe表达情况。结果强力霉素诱导后,筛选的细胞Western blot检测Flag标签蛋白表达明显,免疫荧光显示APPswe蛋白表达增加;撤掉强力霉素后,APPswe蛋白表达减少。结论成功构建了可调控Tet-OnAPPswe...
作者:谭卉卉; 林灿辉; 李街青; 陈佳玲; 史建强; 陈嵘祎; 刘胜波 期刊:《广东医科大学学报》 2019年第05期
作者:郑炜; 程天平; 李向云; 杨帆; 郭亚峰; 张龙军 期刊:《生物医学工程与临床》 2019年第06期
作者:李淼(综述); 尚云晓(审校) 期刊:《国际儿科学》 2019年第11期
囊性纤维化(cystic fibrosis,CF)是由编码cAMP调控阴离子通道的囊性纤维化跨膜电导调节剂(cystic fibrosis transmembrane conductance regulator,CFTR)基因突变引起的常染色体隐性遗传病。CF虽然是一种多器官系统疾病,但大多数CF患者死于继发的肺部疾病,大多在儿童期发病,以慢性细菌感染和炎症为特征。近90%的CF患者至少有一个ΔF508基因拷贝突变,如果有数百个CFTR突变会导致一系列严重的疾病。无论何种致病突变,CFTR基因替代方法...
作者:段安琴; 陆杏蓉; 马小娅; 梁莎莎; 庞春英; 梁贤威; 邓廷贤 期刊:《中国畜牧兽医》 2019年第10期
试验旨在建立水牛原代体细胞慢病毒感染体系。通过比较慢病毒(lentivirus)感染水牛颗粒细胞(buffalo granulosa cell,BuGC)、水牛乳腺上皮细胞(buffalo mammary epithelial cell,BuMEC)、水牛成纤维细胞(buffalo fibroblast cell,BuFC)的效率及荧光强度,筛选出3种水牛原代体细胞的最佳感染复数(MOI)。分离培养获得BuGC、BuMEC及BuFC。将慢病毒质粒pLVX-Puro-GFP和包装质粒pSPAX2、pMAD2.G脂质体转染HEK293T细胞,于转染后48和72 h收...
作者:李胜男; 王梦旭; 胡伟东; 陈少凤; 陈杏兰; 李友 期刊:《吉林大学学报·信息科学版》 2019年第05期
作者:张瑶瑶; 吴国民; 张潇毅; 王琳; 肖艳菊; 王祥伸; 陈楷 期刊:《现代口腔医学》 2019年第05期
目的探讨慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)标记大鼠脂肪干细胞(ADSCs)最适感染复数,检测EGFP-ADSCs干细胞特性及体内活性。方法提取培养大鼠脂肪干细胞,流式细胞仪表型鉴定及成骨、成脂、成软骨多向诱导分化。采用携带增强型绿色荧光蛋白基因的慢病毒载体(Lentivirus-EGFP)以不同的感染复数MOI=0、1、5、10、25、50转染ADSCs,流式细胞仪测转染率,筛选合适MOI。CCK8测转染后ADSCs的增殖能力。EGFP-ADSCs成骨、成脂、成软骨诱...
作者:张璐; 李妍; 李梦怡; 王爔烔; 李楠钰; 孙子雯; 胡竹林 期刊:《国际眼科》 2020年第01期
目的:探讨兔角膜基质细胞(CSCs)体外移植兔角膜后的存活时间。方法:体外培养原代兔CSCs,并行细胞免疫组化鉴定,利用慢病毒载体(LV)携带标记基因增强型绿色荧光蛋白(EGFP)转染兔CSCs,倒置荧光显微镜下观察转染后细胞生长状态及荧光强度,体外动物实验,随机分为2组,实验组行LV-EGFP标记的兔CSCs细胞悬液角膜基质注射,对照组等量生理盐水角膜基质注射,转染后1wk,1mo取材冰冻切片观察移植的CSCs荧光,石蜡切片行苏木素-伊红(HE)染色观察...
作者:赵祝香; 彭芳; 何桦; 李裕军; 赵子文 期刊:《广州医科大学学报》 2017年第02期
目的:克隆人尼古丁受体α5亚单位(CHRNA5),以野生型CHRNA5为模板,通过定点突变法构建CHRNA5突变体(Asn398)慢病毒真核表达载体,为Asn398功能研究提供基础。方法:RT-PCR克隆CHRNA5基因片段,运用重叠延伸PCR法进行定点突变,定向克隆至EX-Q0146-LV201,序列分析鉴定野生及突变重组子,将CHRNA5突变体Asn398及未突变体定向克隆到EX-Q0146-LV201慢病病毒表达质粒上。并转染至HEK293T细胞中,RT-PCR检CHRNA5 mRNA表达,Westernblot检测...
作者:闫海龙; 陈晓旭; 朱晋生; 张鹏飞; 李爽; 曾文先 期刊:《家畜生态学报》 2017年第08期
UTX(ubiquitously transcribed TPR gene on the X chromosome)作为H3K27me2/3的去甲基酶,能够调控动物发育过程,并有着重要的生物学作用。根据猪Utx预测序列,扩增Utx的CDS区全长序列。利用Utx的CDS区序列信息,构建pCD513B-CMV-Utx过表达载体,设计并合成干扰shRNA和阴性对照寡核苷酸片段。其中干扰shRNA及阴性对照通过退火形成双链DNA,并插入pCD513B-U6慢病毒干扰载体。采用双酶切的方法和DNA测序鉴定重组载体。通过干扰和过表达...
作者:赵晗; 金培生 期刊:《徐州医科大学学报》 2017年第05期
目的诱导人脂肪干细胞(adipose—derived stem cells,ADSCs)在体外向表皮细胞分化并探讨RUNX2基因对ADSCs表皮分化的影响。方法利用胶原酶消化法分离培养ADSCs,体外诱导ADSCs向表皮细胞分化。慢病毒载体介导RUNX2基因转染ADSCs并通过Western blot、反转录聚合酶链反应(RT—PCR)及免疫荧光验证RUNX2、相关表皮细胞标记物CK18、ZO-1的蛋白和mRNA的表达。结果ADSCs向表皮诱导14天后,RUNX2、CK18、ZO-1的mRNA及蛋白的表达水平均...
作者:张林霞; 张爱君; 陶常波; 李雪阳; 马志兵; 沈才齐; 金培生 期刊:《徐州医科大学学报》 2016年第04期
目的探讨E-cadherin对人脂肪干细胞(hADSCs)成表皮分化的影响。方法利用胶原酶消化法从成人脂肪组织中分离培养hADSCs。携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的慢病毒载体(Lv-EGFP)介导E-cadherin基因以10、25、50和100的感染复数(MOI)作用72h转染hADSCs,荧光显微镜下观察荧光强度并统计转染效率。Lv-EGFP-E-cadherin过表达组慢病毒和Lv-EGFP对照组慢病毒分别转染hADSCs,未转染的hAD-SCs为空白组;4天后RT-PCR检测E-cadheim...
作者:井超; 徐铁军 期刊:《徐州医科大学学报》 2011年第03期
目的 比较分别经磷酸钙转染法和脂质体转染法建立的第三代慢病毒包装系统的包装效率.方法 制备并纯化完整的重组慢病毒三质粒系统:转移质粒(PXZ171)、包装质粒(△NRF)以及包膜蛋白质粒(VSV-G).分别用磷酸钙法和脂质体法将三质粒共转染包装细胞293T,72 h后收集病毒上清,批量快速测定法测定病毒滴度并进行比较.结果 磷酸钙转染法所产病毒滴度约达到脂质体转染法的1/10.结论 磷酸钙转染法获取的病毒滴度稍低,但价格相对便宜,病...
作者:徐开林; 潘秀英; 杨宇娟; 鹿群先; 李振宇; 何徐彭 期刊:《中华血液学》 2005年第11期
目的观察慢病毒介导的突变型单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-sr39tk)及野生型HSV-tk对T细胞的体外杀伤作用,比较HSV-sr39tk/更昔洛韦(GCV)、HSV-sr39tk/阿昔洛韦(ACV)、HSV-tk/GCV、HSV-tk/ACV对T细胞存活率的影响.方法采用改良的磷酸钙沉淀法将包装质粒、包膜蛋白质粒和含目的基因的转移质粒共转染293T包装细胞,收集的病毒上清感染T细胞后,分别与不同浓度梯度的前体药物GCV和ACV作用4 d后,MTT法测定细胞存活率.结果共转染293T细胞后获...
作者:徐开林; 朱锋; 杜冰; 高飞; 程海; 潘秀英 期刊:《中华血液学》 2007年第05期
目的研究慢病毒载体介导单纯疱疹病毒胸苷激酶/更昔洛韦(HSV-TK/GCV)系统对小鼠异基因骨髓移植(allo—BMT)后移植物抗宿主病(GVHD)的防治作用。方法将转染HSV-TK基因的慢病毒感染供鼠(C57BL/6小鼠)脾脏淋巴细胞,将感染后的淋巴细胞与供鼠骨髓细胞混合,移植给经。Co1射线照射后的受鼠(BALB/c小鼠)。分别于移植后当天、移植后7天(+7天)和+12天腹腔注射GCV25mg/kg×7d,观察受鼠生存期、GVHD发生率及严重程度、T...
作者:曾雅畅; 李慕军; 陈萍; 黄千贻; 蔡君英 期刊:《中国妇幼保健》 2015年第03期
目的:构建全长人β-珠蛋白基因慢病毒载体,稳定转染K562细胞使得β-珠蛋白高效表达,为β-珠蛋白基因添加治疗奠定基础。方法:采用PCR扩增人正常β-珠蛋白基因,加上Sph I和Not I两个酶切位点进行T载体克隆,获得重组质粒p UC57-β-globin。用限制性内切酶连接目的基因片段和慢病毒载体,筛选获得慢病毒表达载体LV-β-globin,测序。将慢病毒载体转染293T细胞,包装病毒。用LV-β-globin感染K562细胞。采用流式细胞仪检测荧光效率,运用实时PCR...
作者:李佩佩; 杨爱武; 王荣跃; 吴余敏; 吕杰强 期刊:《中国妇幼保健》 2016年第23期
目的构建MicroRNA-143慢病毒载体并探讨其在子宫内膜异位发生中的作用及机制。方法分离培养正位和异位子宫内膜基质细胞,检测HOXA10蛋白和MicroRNA-143的表达;构建MicroRNA-143慢病毒载体并感染子宫内膜基质细胞,流式检测HOXA10蛋白的表达。结果正位子宫内膜基质细胞HOXA10蛋白表达的平均荧光强度是异位子宫内膜基质细胞的1.74倍,差异有统计学意义(P〈0.05);异位子宫内膜基质细胞内MicroRNA-143显著低于正位子宫内膜基质...
作者:周进; 李德春; 田青水 期刊:《中国现代医生》 2009年第35期
目的构建RECK基因慢病毒载体,为体内外实验研究提供依据。方法PCR技术构建慢病毒载体表达质粒pGC—FU—RECK,PCR鉴定、测序验证RECK基因,并将其和包装质粒pHelperl.0、pHelper2.0共转染293T细胞,包装产生重组慢病毒GC—FU—RECK。结果pGC—FU—RECK中携有正确的RECK基因,并能在293T细胞中表达;能产生重组病毒GC-FU—RECK。结论成功构建了RECK基因的重组慢病毒载体,为研究其在胰腺癌中的生物学功能奠定基础。
作者:阿依努尔·亚森 期刊:《畜牧兽医科学》 2018年第10期
在对绵羊白细胞中的慢病毒Cdnagag基因进行检验时,通过PCG检测技术的应用还能够起到良好的检测效果,对于该病毒的防治以及促进我国养殖业的发展也有着一定的积极意义。