作者:何旭; 薛艳; 王学宗; 曹月龙; 郑昱新; 丁道芳 期刊:《现代中西医结合》 2019年第34期
目的探讨Klf4基因对大鼠软骨细胞增殖影响及相关机制。方法从出生24 h SD幼鼠的股骨头提取软骨细胞,细胞免疫荧光鉴定Col2a1和Sox9基因的表达。转染慢病毒载体PCDH-GFP-Klf4和辅助质粒PSPAX2及PMD2.0G至293ft细胞中产生慢病毒,48 h后收集病毒上清,用其感染大鼠软骨细胞作为Klf4组,用PCDH-GFP慢病毒感染细胞作为对照组。采用CCK8法检测2组细胞生长增殖变化;采用Western blot方法,分别检测2组细胞中Klf4基因表达、增殖相关基因PCNA和...
目的 探讨启动子甲基化对CEM/C1白血病细胞KLF4基因的作用及5-Aza-CdR干预对启动子甲基化的影响。方法 使用不同浓度的5-Aza-CdR处理急性淋巴细胞白血病CEM/C1细胞,采用噻唑蓝(MTT)检测去甲基化药物5-Aza-CdRa对CEM/C1细胞增殖的影响,并利用半定量逆转录聚合反应(RT-PCR)检测去甲基化药物处理后CEM/C1细胞中KLF4基因mRNA的表达水平。结果 5-Aza-CdR抑制体外培养的人急性淋巴细胞白血病CEM/C1细胞增殖,呈浓度依赖性。经5-Aza-Cd...
作者:王春生; 杨越飞; 宁方勇; 薛超; 朴善花; 安铁洙 期刊:《中国兽医学报》 2011年第08期
Klf4作为诱导产生多能性干细胞的基因之一,在体细胞的重编程过程中发挥着重要的作用。为构建绵羊Klf4基因逆转录病毒载体,参照本实验室已克隆出的绵羊Klf4基因编码区(GenBank登录号GQ280389)设计引物,将扩增的基因片段经过酶切后亚克隆到逆转录病毒载体pMXs的多克隆位点,经过酶切、PCR和测序鉴定正确后,和包装质粒pVSV-G联合转染293GP细胞获得重组逆转录病毒。通过绵羊胎儿成纤维细胞检测病毒侵染能力,并使用RT-PCR和SDS-PAGE方...
作者:孟书燕; 郭杰; 高庚渠; 刘改霞; 马威 期刊:《安徽农业科学》 2016年第12期
[目的]对小鼠Klf4基因重组蛋白进行原核表达分析。[方法]利用双酶切从重组质粒p MXs-Klf4上回收小鼠Klf4基因片段,克隆入p ET-41a(+)载体后转化BL21大肠杆菌,用IPTG诱导表达,探讨诱导表达最佳浓度和时间,最后采用SDS-PAGE对重组蛋白进行鉴定及分析。[结果]重组质粒Klf4-p ET-41a(+)在IPTG诱导下可表达与预期相符的约为51 ku的KLF4蛋白;经IPTG刺激后重组蛋白表达增多,以0.8 mmol/L IPTG诱导6 h为佳;重组蛋白以包涵体形式存在...
作者:辛晓玲 吕长荣 陈冬梅 窦忠英 期刊:《畜牧兽医学报》 2010年第12期
为了克隆牛Klf4基因并构建重组反转录病毒载体,得到稳定的产毒细胞株,本研究设计了带有酶切位点的一对引物,以接触抑制生长状态的MDBK细胞为材料,用RT-PCR方法克隆出牛Klf4基因的开放阅读框序列,将之插入干细胞反转录病毒载体pMSCVneo构成真核表达载体pMSCV-Klf4;采用脂质体法将pMSCV-Klf4转染包装细胞PT67,通过G418筛选得到稳定的产毒细胞株,电镜观察培养液上清中的病毒颗粒,同时病毒感染NIH3T3细胞测定其病毒滴度。结果表明,本研...
作者:李明闯 王瑞娟 陈国 张青松 吴迪 吕晶 霍彦平 殷德涛 期刊:《中华内分泌外科》 2015年第06期
目的抑癌基因甲基化具有可逆性,相关药物可逆转甲基化使失活的基因重新表达。本研究观察去甲基化制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对体外培养的人甲状腺癌TPC-1细胞增殖的影响,及5-iza-CdR对KLF4基因mRNA和蛋白表达水平的影响。方法使用不同浓度的5-Aza-CdR处理TPC-1细胞,采用MTF检测5-Aza-CdR对细胞增殖的影响,利用RT-PCR及蛋白质印迹法(Westemblot)方法检测KLF4基因mRNA和蛋白表达的水平。结果5-Aga—CdR作用于TPC-1...