作者:王秋霞; 王芳; 楚富茗; 魏小兵; 胡会龙; 刘兴友; 余燕; 张艳红; 马金友; 姜金庆; 欧长波 期刊:《中国兽医科学》 2020年第01期
在禽源疾病发生发展过程中,趋化因子CCL4的作用尚不清楚。对克隆的禽源CCL4基因序列分析显示,其ORF包含270个碱基,编码90个氨基酸,与GenBank中登录的禽源CCL4序列完全一致;利用原核表达载体pET30a对CCL4的成熟肽部分进行表达,IPTG诱导后,进行SDS-PAGE电泳,结果与预期一致,在约11 ku处出现明显蛋白条带。使用经镍柱纯化获得的目的蛋白免疫家兔,制备多克隆抗体。经Western-blot检测,获得的抗体能与CCL4蛋白发生特异性反应。禽源CCL4...
作者:刘春; 韩宇; 荣海博; 侯勇; 陈玉琳; 高志宏; 夏庆友 期刊:《蚕学通讯》 2009年第01期
本研究通过用回收纯化的Fib-L蛋白为抗原免疫家兔,获得多克隆抗体,通过与家蚕大造5龄5d的10个不同组织进行Western blot,结果表明,制备的FbL抗体能识别在后部丝腺特异合成的Fib-L蛋白,表明该抗体有较好的特异性。利用此抗体进行丝腺组织的免疫组化,经抗体的一系列的梯度稀释和条件探索,发现当Fib-L-抗在1:50和荧光二抗1:1000的条件下得到理想的免疫组化结果,在荧光显微镜下观察到了二抗标记的绿色荧光。以上结果显示,本...
作者:郭玉静; 许均华; 赵舟宙; 朱晨刚 期刊:《生物资源》 2007年第02期
目的:获得纯化抗原用于制备ZNF268的多克隆抗体。方法:PCR扩增目的基因片Spacer区序列,亚克隆入融合蛋白表达载体pET28a+,构建了重组质粒pET28a+/SPA。然后将该重组质粒转化E.coliDE3(Rosseta),IPTG诱导表达,SDS-PAGE分离,获纯化融合蛋白6His-SPA。用6His-SPA免疫家兔,颈动脉取血,分离血清,从血清中获得ZNF268特异的多克隆抗体。结论:通过构建融合蛋白重组表达质粒pET28a+/SPA,用获得的初步纯化融合蛋白6His-SPA,制备了特...
作者:冯雳; 魏志新; 花梦婷; 邢俊俏; 陈龙; 丁梅 期刊:《湖南师范大学自然科学学报》 2019年第06期
为后续研究纤毛相关蛋白IFT144的功能,通过构建重组表达载体获取IFT144抗原蛋白,利用纯化过后带有His标签的IFT144抗原蛋白免疫新西兰白兔,收集4次免疫后的血清,间接ELISA法测定抗血清效价为1∶521000。经Western blot及免疫荧光技术检测表明,纯化后的抗血清能够与Chlamydomonas reinhardtii 21gr(CC1690)鞭毛IFT144蛋白特异性结合,说明anti-IFT144特异性良好。该抗体效价高,特异性良好,为IFT144蛋白的功能及其相关机制的研究提供...
作者:刘雨飞; 丁丽华; 郝春芳; 方言; 赵福弟; 黄翠芬; 杨晓; 叶棋浓 期刊:《中国生物化学与分子生物学报》 2004年第06期
人X盒结合蛋白1(XBP-1)为一种转录因子,与多种肿瘤的发生、发展有密切关系.XBP-1有2种剪切形式,即XBP-1S和XBP-1U.将这2种剪切形式中的一段相同编码序列(编码82~147位氨基酸)重组于谷胱甘肽s转移酶(GST)融合蛋白表达载体pGEX-KG中,构建成重组质粒pGST-XBP-1(82~147位氨基酸).将该重组质粒转化E.coli DH5α后,表达GST-XBP-1(82~147位氨基酸)融合蛋白,经谷胱甘肽-Sepharose 4B亲和层析获得纯化的融合蛋白.用此融合蛋白免...
作者:胡三梅; 陈凤玲; 陈天钦; 叶廷军; 李荣英; 史文静; 宋怀东; 陆振虞 期刊:《中国生物化学与分子生物学报》 2005年第01期
Mimecan/osteoglycin是一种分泌型蛋白质,目前其功能尚不明确.从人垂体cDNA中克隆到OIF基因并构建成重组表达质粒pGEX-5X-2/mimecan,将此重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后用IPTG诱导,成功表达了一种分子量约为38 kD融合蛋白,约占菌体总蛋白的30%~40%.此融合蛋白经纯化分离后免疫新西兰大白兔以制备多克隆抗体.用Western印迹法检测兔的抗血清.结果显示,该多克隆抗体有较好的针对mimecan蛋白的专一性并且效价较高,可用于对mimec...
作者:连凯琪; 周玲玲; 张明亮; 张慢; 王英杰; 林正丹; 宋玉伟 期刊:《河南农业科学》 2020年第01期
为了开发塞尼卡谷病毒(Seneca Valley virus,SVV)的检测试剂盒,克隆3 ABC基因进行原核表达和纯化,并将纯化的3ABC蛋白免疫大鼠,制备抗3ABC蛋白的多克隆抗体。通过Western blot鉴定制备的多克隆抗体与表达的3ABC蛋白的特异性识别能力,通过ELISA测定多克隆抗体的效价。结果显示,3 ABC基因在大肠杆菌中大量表达,且主要以包涵体形式表达,重组蛋白分子质量约为55 ku,经纯化后得到单一条带。免疫大鼠制备的多克隆抗体效价大于1∶64000,且...
作者:周游; 杨文涛; 黄科谚; 晋玉北; 冯博; 石春卫; 黄海滨; 王建忠; 姜延龙; 康元环; 杨桂连; 王春凤 期刊:《黑龙江畜牧兽医》 2019年第19期
为了研究鹅α干扰素(goIFN-α)基因原核表达产物的反应原性并进行goIFN-α抗血清的制备,试验首先根据大肠杆菌偏爱密码子对goIFN-α基因进行优化,随后采用PCR方法扩增goIFN-α编码序列并进行同源性分析。将goIFN-α片段与表达载体pET-28a连接,构建重组表达质粒pET-28a-goIFN-α,然后将重组表达质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导后进行SDS-PAGE和Western-blot检测。通过切胶回收的方法回收目的条带,将碾碎的蛋白胶与PBS...
作者:任肖; 吴竞; 于海男; 林伟东; 侯绍华; 郭晓宇; 朱鸿飞 期刊:《中国畜牧兽医》 2019年第12期
本研究旨在通过原核表达系统表达非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)Georgia 2007/1株EP 402 R基因,获得其编码的CD2v重组蛋白,并针对纯化的CD2v重组蛋白制备多克隆抗体。将ASFV EP 402 R全长基因进行密码子优化后连入pET-28a(+)表达载体,构建原核重组表达质粒,经1 mmol/L IPTG于16℃诱导12 h后,利用SDS-PAGE和Western blotting对重组蛋白进行表达鉴定和反应原性分析。以纯化的CD2v重组蛋白为免疫原制备鼠源抗CD2v多克...
作者:潘传燕; 冯鹏霏; 张永德; 罗洪林 期刊:《福建农业学报》 2019年第09期
【目的】为研究尼罗罗非鱼过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)的表达情况,通过大肠杆菌表达系统表达PPARδ,纯化重组蛋白并获得多克隆抗体。【方法】对PPARδ进行生物信息学分析后设计特异性引物,扩增PPARδ,将其克隆至原核表达载体pET-B2m中,构建重组表达载体;重组质粒转入大肠杆菌B21并用IPTG进行诱导表达,用SDS-PAGE鉴定表达产物。用镍柱纯化重组蛋白后免疫日本大耳兔制备多克隆抗体,用间接ELISA技术检测抗体效价,Western Blot鉴...
作者:韩鹏飞; 闫珍; 樊振川 期刊:《食品与生物技术学报》 2019年第11期
IFT57是纤毛内运送蛋白IFT B复合物的一个重要组分,在鞭毛组装中发挥着重要作用。利用莱茵衣藻ift57基因中一段编码亲水性氨基酸序列的片段构建了带有6×His标签的原核表达载体pET-28a(+)-ift57,并转入大肠杆菌BL21(DE3),通过IPTG诱导表达蛋白质,以12 g/dL SDS-PAGE鉴定,获得相对分子质量大小为17200的ITF57重组蛋白质片段。对6×His-IFT57融合蛋白质进行纯化,并用其免疫新西兰大白兔,采集第5次免疫后血液并分离血清。利用Western bl...
作者:罗波; 李想; 周必英 期刊:《中国人兽共患病学报》 2019年第12期
目的建立猪带绦虫Ts14-3-3.3蛋白原核表达系统并制备兔多克隆抗体。方法通过逆转录PCR(RT-PCR)技术将猪囊尾蚴总RNA反转录为cDNA,利用特异性引物扩增猪带绦虫Ts14-3-3.3基因,将其克隆至原核表达质粒pCznⅠ中,在大肠杆菌Arctic Express中用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析其表达产物,用HisLink亲和层析柱进行纯化,免疫印迹(Western blot)法鉴定纯化后的Ts14-3-3.3重组蛋白。...
作者:魏博帆; 王景娅; 孙妍妍; 王露; 李晓哲; 邱礽; 乔惠丽 期刊:《中国农学通报》 2019年第34期
为了制备家蚕CSP9的多克隆抗体,研究该蛋白在家蚕中的表达特征和功能。利用PCR扩增家蚕csp9基因,构建其原核表达载体,诱导CSP9蛋白表达并纯化。纯化后的CSP9蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,Western杂交检测CSP9在家蚕中的表达特征。最终成功构建csp9/pET-28a原核表达载体,并纯化获得与预测分子量一致的CSP9蛋白;成功制备了CSP9多克隆抗体。Western杂交结果表明,CSP9在家蚕不同时期和不同组织中都有特异表达。本研究成功表达纯...
作者:廉芳; 朱中元; 裴华; 陈运春; 谢勇; 张天蔚; 卢姿; 邱文华 期刊:《细胞与分子免疫学》 2019年第07期
目的制备兔抗人视黄醇结合蛋白(RBP)多克隆抗体。方法逆转录PCR扩增人RBP基因,将扩增产物连接到原核表达载体pET-28a(+)上,构建重组质粒pET-28a(+)-RBP,转化至大肠杆菌中。用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其表达,表达产物经SDS-PAGE分析鉴定出阳性克隆,扩大培养。用组蛋白标签(His-tag)纯化柱纯化重组蛋白。将纯化的重组蛋白皮下注射到新西兰白兔, 4次加强免疫得到抗血清。从抗血清中纯化出抗RBP多克隆抗体,并进行SDS-PAGE、 ...
作者:周芝海; 谭耀荣; 郑瑶瑶; 曾繁文; 麦凯杰; 马静云 期刊:《中国兽医科学》 2019年第09期
为了制备猪急性腹泻综合征冠状病毒(SADS-CoV)核衣壳(N)蛋白多克隆抗体,采用PCR方法扩增SADS-CoV/CN/GDGL/2017毒株N基因片段,并对N基因的序列以及N蛋白氨基酸突变位点进行分析。随后,将N基因片段克隆到原核表达载体pET-32a(+)构建重组质粒,测序验证后转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行原核表达,用Ni-NTA亲和层析柱纯化N蛋白,通过免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体。结果表明,扩增的N基因片段和所构建的重组质粒正确无误,成功诱...
作者:杨瑞; 熊乙丁; 郭珊珊; 廖业; 夏嫱; 郭锦锦; 杜联峰 期刊:《中国病原生物学》 2019年第11期
作者:袁媛; 陈志; 罗卫星; 蔡惠芬 期刊:《黑龙江医药科学》 2019年第05期
目的:为了制备抗体效价高、特异性好,可有效满足RERG基因(Ras-related and estrogen-regulated growth inhibitor)上蛋白的相关测定,填补RERG多克隆抗体的研究空白。方法:试验使用已经在实验室中克隆的RERG基因序列用于原核表达载体,构建原核表达载体pET32a-RERG;随后进行RERG蛋白的原核表达;完成RERG蛋白的纯化以及大白兔RERG多克隆抗体的制备与纯化。结果:通过Western-blot鉴定发现RERG的目的条带单一;使用ELISA检测纯化后的抗体...
作者:李嘉波; 秦真东; 赵丽娟; 刘志刚; 可小丽; 吴灶和; 刘小玲; 卢迈新; 林蠡 期刊:《水产学报》 2020年第01期
为研究罗非鱼湖病毒在吉富罗非鱼体内和敏感细胞E-11中的感染特性,实验首先从人工感染罗非鱼湖病毒的吉富罗非鱼脾脏中获得罗非鱼湖病毒第4片段基因组,其cDNA全长1250 bp,开放读码框长度为1065 bp,编码354个氨基酸。通过进化树分析,该蛋白是罗非鱼湖病毒血凝素-酯酶融合蛋白(HEF)。随后通过在大肠杆菌大量表达和提纯GST融合HEF蛋白,免疫新西兰大白兔,制备了兔抗TiLV-HEF多克隆抗体。ELISA结果显示获得的抗血清效价高于1∶51200,并...
作者:王婷婷; 索倩; 孙晓燕; 马跃敏; 刘凯于; 彭建新; 彭蓉 期刊:《昆虫学报》 2019年第09期
【目的】激活增强子结合蛋白4(activating enhancer binding protein 4, AP-4)是近年来备受关注的一类功能广泛的转录因子,参与Wnt/β-catenin信号通路的调控。本研究旨在研究棉铃虫Helicoverpa armigera HaAP-4基因的原核表达并制备多克隆抗体,明确HaAP-4基因的时空表达谱,初步探究HaAP-4对棉铃虫胆固醇载体蛋白2(sterol carrier protein-2, SCP-2)基因(HaSCP-2)表达的调控作用。【方法】通过PCR扩增棉铃虫HaAP-4基因片段,将其克隆...
作者:张海棠; 王晓斐; 职爱民; 王亚楠; 王自良 期刊:《核农学报》 2019年第12期
为制备B族黄曲霉毒素(BGAFs)特异性强、广谱性好的抗体,本研究根据黄曲霉毒素B1(AFB1)的分子结构和活性位点,采用肟化活泼酯法(OAE)、氨甲基化法(MOA)、混合酸酐法(MA)、半缩醛法(SA)、环氧化物法(EP)和烯醇醚衍生物法(EED)6种方法合成BGAFs人工抗原AFB1-BSA,并通过UV和SDS-PAGE进行鉴定;采用AFB1-BSA免疫新西兰白兔制备多克隆抗体(AFB1 pAb),间接ELISA检测AFB1 pAb效价,间接竞争ELISA(icELISA)分析其敏感性,交叉反应试验(CR)分析...